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    生物通首頁 > 今日動態(tài) > 專題總匯 > 核酸檢測的一場革命,可替代PCR的犀利技術(shù)


           自PCR技術(shù)誕生以來已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實時定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR,這一技術(shù)在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。重組酶聚合酶擴增RPA,被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp® 核酸擴增產(chǎn)品,能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測。

    核酸檢測的一場革命,可替代PCR的犀利技術(shù)




          什么是RPA技術(shù)


    RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應(yīng)溫度在37°C左右。

    重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

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    RPA檢測不僅速度快而且靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂崮0鍞U增到可以檢出的水平。RPA既可以擴增DNA也可以擴增RNA,還省去了額外的cDNA合成步驟。你不僅可以對擴增產(chǎn)物進行終點檢測,還可以對擴增過程進行實時監(jiān)控,甚至能通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。



          RPA技術(shù)的實戰(zhàn)攻略


    PCR替代技術(shù),RPA全攻略之疑難解答
    了解了RPA技術(shù)的原理和特色,現(xiàn)在你一定對這個技術(shù)產(chǎn)生了不少疑問。

    PCR替代技術(shù),RPA全攻略之引物設(shè)計
    RPA的擴增引物可以說是整個反應(yīng)的關(guān)鍵所在,那么怎樣才能設(shè)計好RPA引物呢?

    PCR替代技術(shù),RPA引物與探針的常見問題
    在RPA擴增的基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針,可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。



          RPA技術(shù)的應(yīng)用


    RPA在HIV檢測中大顯身手
    PCR是嬰兒HIV診斷的金標方法,但許多地區(qū)并不具備這樣的條件,而RPA技術(shù)正好可以大展身手。

    RPA在癌癥研究中的應(yīng)用
    RPA不僅可以實現(xiàn)癌癥突變的快速檢測,還能用于抗癌藥物的快速篩選。

    RPA檢測埃博拉等致命病毒
    研究者們在RPA技術(shù)的基礎(chǔ)上,開發(fā)了檢測多種致命病毒的快速方案。

    RPA成為致病菌檢測的得力工具
    在臨床診斷和食品安全領(lǐng)域,RPA技術(shù)可以對常見致病菌進行快速檢測。

    農(nóng)科院專家用RPA快速檢測轉(zhuǎn)基因作物
    要更好的管理轉(zhuǎn)基因作物,就需要快速而簡便的檢測方法

    RPA技術(shù)試水二代測序的文庫制備
    未來,經(jīng)過優(yōu)化的RPA技術(shù)將有望用于二代測序的樣本制備。





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