生物通報道：重組酶聚合酶擴增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA擴增的速度非常快，靈敏度高，對硬件設備要求低，而且不需要復雜的樣本處理。這樣的技術特別適合于體外診斷、獸醫、食品安全、生物防御、農業等領域。

大規模并行測序技術（即二代測序NGS）是基因組和遺傳學領域的一次技術革命。NGS自誕生以來，不論是測序規模還是測序效率都有了飛速的提升。盡管這一技術已經取得了巨大的成功，但有著極端堿基組成的基因組區域，對于目前的NGS平臺來說仍然是一個很大的挑戰。

不少重要的病原體都具有極端的堿基組成，比如瘧原蟲（高AT含量）和結核桿菌（高GC含量）。PCR擴增是標準的文庫制備程序，不過PCR會導致不均勻的讀取覆蓋度（特別是在富含AT和GC的區域），最終影響基因組的裝配和變異分析。而省卻PCR擴增的文庫制備方案，需要大量的初始材料，不適合處理從臨床上分離的樣本。

為此，Wellcome Trust Sanger 研究所的研究團隊對測序文庫的制備進行了優化，找到了既適合低量樣本又耐受高AT含量的文庫制備方案。這項研究發表在2012年的BMC Genomics雜志上。

研究人員用非臨床和臨床分離物（含大約53%的宿主污染物）制備Illumina測序文庫，分別使用了不同的聚合酶、PCR和RPA方法，并對測序結果進行了分析和比較。他們在此基礎上增強了高AT含量區域的測序覆蓋度，減少了極端堿基組成帶來的偏向性。

這項研究的RPA等溫擴增直接使用了TwistAmp基礎反應，沒有進行任何優化。結果顯示，RPA制備測序文庫時產量相對較高，與標準Illumina文庫制備相比，對極端堿基組成的模板偏向性較少，覆蓋度有一定的提升。不過測序后的嵌合和重復讀取（chimeric and duplicate reads）相對較多。（延伸閱讀：核酸檢測的一場革命，可替代PCR的犀利技術）

這次嘗試說明，未來經過優化的RPA技術將有望用于二代測序的樣本制備。（參考文獻：Optimizing Illumina next-generation sequencing library preparation for extremely AT-biased genomes.）