Part 1  膜的選擇

印跡所使用的膜的類型可能影響下列因素：

• 蛋白質結合能力
• 是否需要用醇預濕
• 開展多次剝離（stripping）和再生檢測（reprobing）實驗的能力
• 蛋白質觀察
• 長期印跡保存
• 信噪比

聚偏二氟乙烯（PVDF）和硝酸纖維素是Western印跡應用中最常用的兩種類型的膜。

與硝酸纖維素膜相比，電轉到PVDF膜上有許多優點。PVDF膜可提供更好的蛋白質截留率、物理強度和廣泛的化學兼容性（Pluskal等，1986）。其中更高的機械強度和出色的耐化學性讓PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應用和二次檢測的理想選擇。使用PVDF膜的另一個優點是，單塊凝膠上的平行重復泳道可用于各種應用中，如考馬斯藍染色，接著切割條帶進行N端測序，蛋白質水解/肽段分離/內部測序，以及免疫檢測（Kurien等，2003）。市售的硝酸纖維素膜的典型結合能力是80 – 100 μg/cm²，而PVDF膜的結合能力是100 – 200 μg/cm²。

在檢測血清中人免疫缺陷病毒（HIV）時直接比較PVDF和硝酸纖維素膜，結果表明，PVDF膜有著更好的總體HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗體對糖基化包膜抗原的檢測（Lauritzen和 Pluskal，1998）。硝酸纖維素膜和PVDF膜的特性比較詳見表1。

表1. PVDF和硝酸纖維素膜特性及應用的比較。

Immobilon® PVDF轉印膜

默克密理博提供三種PVDF膜：

• Immobilon®-P膜（0.45 μm）是一種通用的基質，適用于一般的免疫印跡應用。
• Immobilon®-PSQ膜（0.2 μm）適用于蛋白質測序和低分子量蛋白的免疫印跡。它有著更高的蛋白質結合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。
• Immobilon®-FL膜（0.45 μm）是為熒光免疫檢測而開發的。它在多種激發和發射波長范圍內的熒光背景都極低。

Immobilon® 轉印膜以卷膜和方片膜形式提供。預切好的膜與所有預制膠以及大部分市售的凝膠電泳系統兼容。Immobilon® 轉印膜的性質詳見表2。表3列出了與最常用的電泳系統相匹配的Immobilon® 預切膜的尺寸。表4列出了與現有的預制膠相匹配的Immobilon® 預切膜的尺寸。

表2. Immobilon® PVDF轉印膜的性質和應用。

表3. Immobilon® PVDF預切轉印膜和匹配的電泳系統。

表4. Immobilon® PVDF預切轉印膜和匹配的預制膠。

（實際內容以《蛋白質印跡手冊》印刷版為準，如有錯漏，敬請諒解）

立即索取印刷版《蛋白質印跡手冊》