自1979年推出以來（Towbin等，1979）蛋白質印跡已成為研究實驗室的一種常規工具。它通常用于檢測復雜樣品中的少量蛋白質，或監控蛋白質表達與純化。最簡單的蛋白質印跡操作，被稱為斑點印跡或狹縫印跡，利用真空抽濾將蛋白質轉移到一塊微孔膜上。盡管這種方法可提供蛋白整體表達水平的定量信息，并可以平行開展多個樣品的檢測，但它缺乏蛋白分子量的信息。同時，特異性也會受損，因為蛋白質降解產物或翻譯后修飾的異構體也能隨著完整蛋白一起被檢測。

Western印跡是一種更為復雜的操作，它包含通過凝膠電泳來分離蛋白質復合物，隨后電轉移到適當的膜（如PVDF）上。在蛋白質轉移至PVDF膜后，它們可被染色，以便觀察，也可直接通過N端測序、質譜分析或免疫檢測來鑒定。免疫檢測包含通過蛋白質與特異抗體的反應來鑒定這種蛋白質。通過空間分辨，這種方法能夠提供各個蛋白的分子量信息，并能區分異構體、選擇性加工產物及其他的翻譯后修飾形式。

在臨床實驗室，免疫印跡已在傳染病和自身免疫性疾病、過敏及其他領域被證明是有用的（Towbin等，1989；Stahl等，2000）。Western印跡被公認是在病毒感染過程中，繼重復反應ELISA之后的一種可靠的確診的臨床檢測，也是一種靈敏、明確而簡單的分析，可提供高度復雜的信息（Bauer，2001；Mylonakis等，2000；Heermann等，1988）。

Western印跡的應用實例包括通過定量Western分析來分析酵母中的蛋白質表達（Ghaemmadami等，2003），蛋白質拷貝數和區室化（compartmentalization）的鑒別（Rudolph等，1999），ATP競爭性蛋白激酶抑制的研究（Wang和Thompson，2001），以及作物和食品中轉基因生物的檢測（Ahmed，2002）。

無疑，蛋白質印跡一直是探索性研究的理想平臺，也依然是評估新抗體及其他蛋白檢測分析（如ELISA、基于磁珠的分析、流式細胞分析和免疫組化）的標準。然而，同時分析更多蛋白質以鑒定復雜的蛋白質互作網絡的需求，以及保留珍貴樣品的相關需求，一直在推動研究不斷改進印跡技術的靈敏度和速度。一種“雙印跡（double blotting）”方法（Lasne，2001，2003）可消除由于印跡蛋白與無關二抗之間強的非特異性相互作用造成的假陽性。Far-Western印跡技術可實現蛋白質間特異相互作用的檢測（Grasser，1993），而Southwestern印跡被用于鑒定與特定DNA序列相互作用的蛋白質（Silva，1987）。Multistrip Western印跡被證明能提高通量，同時最大限度減少印跡間的可變性（Aksamitiene，2007）。新一代印跡技術的特點是產生信號所需的蛋白量減少（Swank，2006），以及改善Western印跡的定量能力（Schilling，2005a；2005b）的各種方法。

更好的膜，更好的印跡。

近四十年來，默克密理博一直是轉印膜的領先供應商。1975年，E.M. Southern使用這些膜首次開發出從瓊脂糖凝膠上轉移核酸1。第一款用于Western印跡的0.45 μm PVDF基質，Immobilon®-P膜，在1985年推出，而第一款用于蛋白質印跡和測序的0.2 μm PVDF基質，Immobilon®-PSQ膜，在1988年推出。

除了Immobilon® 膜和試劑，默克密理博還為蛋白質研究提供了廣泛的其他工具，包括溫和的蛋白質提取試劑盒，通過PureProteome™磁珠快速分離蛋白質，以及通過Amicon® Ultra離心過濾器高效濃縮。

從何處獲得更多信息

如果您有問題或需要協助，請聯系默克密理博的技術服務專家，或在線提出您的問題，地址在：www.emdmillipore.com/techservice

您還可以找到關于Western印跡及其他相關方法的常見問題（FAQ）的答案，地址在：www.emdmillipore.com/wb_faqs

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關于第六版

隨著蛋白質印跡手冊第六版的出版，默克密理博公司一如既往地協助研究人員緊跟蛋白質檢測的前沿進展。我們在優化抗體濃度和降低背景方面增加了更全面的指引，同時擴展了熒光檢測的數據和操作步驟。

這本手冊代表了我們應用科學家的集體經驗和智慧——正是他們一直積極參與推進蛋白質印跡和檢測技術。這本手冊也包含了我們技術服務專家所提供的許多最常見的建議，世界各地的科學家常常聯系他們尋求幫助。

（實際內容以《蛋白質印跡手冊》印刷版為準，如有錯漏，敬請諒解）

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