擺脫WB檢測LC3條帶總是變幻無常的煩惱

自噬是一種天然的、保守的細胞降解機制，參與多種疾病過程，包括癌癥、神經退行性疾病、自身免疫性疾病、衰老、細胞死亡、心臟病和感染，并幫助細胞清除受損的蛋白質、細胞器、病原體或聚集體，并被認為是一種程序性細胞死亡機制，自噬調節細胞死亡的潛在能力使其成為癌癥的治療靶點 [1, 2]。

LC3家族包括LC3A、LC3B和LC3C三個亞型。LC3B是研究最多的一個亞型，也是公認的自噬關鍵指標。LC3B的前體形式為proLC3B，被ATG4蛋白裂解后生成LC3B-I（約16kDa），LC3B-I被ATG7和ATG3修飾和加工后，再與磷脂酰乙醇胺(PE)結合，生成LC3B-II（約14kDa）， LC3B-II是自噬體標記的關鍵蛋白之一。

LC3B-II形成過程（From Agrotis et al., 2019）

為了滿足LC3B-II特異性檢測的需求，我們全新推出HTRF LC3B-II檢測試劑盒，能夠特異性檢測LC3B-II而不識別LC3B-I。目前，Western Blot是常用的LC3B檢測方法，但是已有的WB抗體無法區分LC3B-I和LC3B-II，均相免洗的HTRF LC3B-II檢測試劑盒，在簡化實驗流程的同時，更進一步提升了LC3B-II檢測的靈敏度和特異性。

新品介紹

品名：HTRF Human and Mouse LC3B-II Detection Kit

貨號：500 tests (64LC3B2PEG); 10,000 tests (64LC3B2PEH)

特異性檢測LC3B-II的HTRF模型

操作步驟

兩板法檢測流程

一板法檢測流程

驗證數據

U-87MG cells用自噬抑制劑HCQ （羥化氯喹）處理4小時，棄培養基并裂解，分別取16ul裂解物用于HTRF 及Western Blot平行檢測。結果如下圖所示，HTRF LC3B-II Detection Kit和Western Blot結果具有可比性且高度相關。

相關性驗證

同時，近單倍體細胞HAP1  KO實驗結果證實，HTRF LC3B-II Detection Kit對LC3B-II的檢測具有高度特異性和選擇性。

特異性驗證

不同細胞密度的U-87 MG cells用mTOR 抑制劑AZD2014 (Vistusertib)處理， HTRF 及Western Blot平行對比結果顯示，HTRF LC3B-II Detection Kit的檢測靈敏度是Western Blot檢測方法的2倍。

靈敏度驗證

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參考文獻

1. Mathew R, Karantza-Wadsworth V, White E. Role of autophagy in cancer. Nat Rev Cancer. 2007;7(12):961–7.

2. White E, DiPaola RS. The double-edged sword of autophagy modulation in cancer. Clin Cancer Res. 2009;15(17):5308–16.