iBlot 3 快速蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)是新一代的干式蛋白轉(zhuǎn)印解決方案，采用即用型耗材，在iBlot 2 的基礎(chǔ)上進一步優(yōu)化性能，提高通量和使用便捷性。Invitrogen™ iBlot™ 3 快速蛋白印跡轉(zhuǎn)印設(shè)備可最大程度地提高實驗效率，實現(xiàn)卓越的轉(zhuǎn)印效果，并有助于獲得一致且可重復(fù)的實驗結(jié)果。

圖1. iBlot 3 快速蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)

提高實驗效率

iBlot 3 系統(tǒng)有兩個獨立控制的工作艙，同時運行兩個不同的程序，同時完成總共 4 塊小型凝膠（ mini） 或 2 塊中型凝膠（midi）的轉(zhuǎn)印，實現(xiàn)設(shè)備的共享。系統(tǒng)內(nèi)置多種預(yù)編程序，輕松選擇，縮短方案設(shè)置時間。

圖2. iBlot 3帶有左右連個工作艙，每個工作艙可以同時轉(zhuǎn)印最多2塊mini膠或者塊midi膠，兩個工作艙可以運行不同的轉(zhuǎn)印程序

圖3. iBlot 3 設(shè)備可獲得一致的結(jié)果。將連續(xù)稀釋的HEK293 裂解物（在Thermo Scientific RIPA 緩沖液中裂解）加到四種Invitrogen™ Bolt™ 4至12% Bis-Tris Plus 凝膠上（ 從左至右， 單位μg）：10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078、0.039、0.020 和0.010。將Invitrogen™ iBright™預(yù)染蛋白marker 加到最后一道。使用MES-SDS 緩沖液進行凝膠電泳。使用寬范圍（30-250 kDa）預(yù)編程轉(zhuǎn)印方法（25 V，6 min，低冷卻），使用iBlot 3 快速蛋白印跡設(shè)備和iBlot 3 轉(zhuǎn)印膜組（midi, NC），轉(zhuǎn)印蛋白質(zhì)。用Pierce 透明牛奶封閉緩沖液封閉印跡，然后使用抗表皮生長因子受體（EGFR）、鈣網(wǎng)蛋白和p23 牛奶溶液的一抗孵育12 小時。在TBST 中制備二抗Invitrogen™ GAR-Alexa Fluor™ Plus 800 染料、Invitrogen™ GAMAlexaFluor™ Plus 488 染料和Invitrogen™ GAChk-Alexa Fluor™ 546 染料，加入到印跡膜中孵育2 小時。以上抗體孵育流程在Bandmate 自動化蛋白印跡處理器上完成。在iBright FL1500 成像系統(tǒng)上完成成像。注：GAChk = 山羊抗雞

提高轉(zhuǎn)印效率

新設(shè)計具有內(nèi)置可調(diào)控冷卻系統(tǒng)，可優(yōu)化高分子量和低分子量蛋白的轉(zhuǎn)印效果。

圖4. iBlot 3 系統(tǒng)具有優(yōu)異的轉(zhuǎn)印效率。（A）Hsp70：Ivitrogen™ NuPAGE™ 4% 至12% Bis-Tris mini 凝膠，每孔加入梯度稀釋的20、15、10、5、2.5、1.25、0.625 和0.312 μg 的A431。電泳后，使用上述方法和條件轉(zhuǎn)印蛋白質(zhì)。使用Invitrogen ™ Bandmate ™自動化蛋白印跡處理器完成抗體孵育。使用Thermo Scientific™ Pierce™ 透明牛奶封閉緩沖液孵育印跡膜30 分鐘。將Hsp70 一抗（1:1000 透明牛奶封閉液）加入印跡膜中，并在室溫下孵育12 小時。去除一抗，將GAM-HRP 二抗（1:120000，TBST）加入印跡膜中，孵育2 小時。使用Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura化學發(fā)光底物進行檢測。使用Invitrogen™ iBright™ FL1500 成像系統(tǒng)捕捉圖像。繪制每條泳道中裂解物條帶的局部背景校正灰度圖。（B）4EBP1 ：Invitrogen™ Novex™ 16% Tricin mini 凝膠，每孔加入有10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 和0.078 μg 的A431。電泳后，使用上述方法和條件轉(zhuǎn)印蛋白質(zhì)。使用Bandmate自動化蛋白印跡處理器完成抗體孵育。印跡與Pierce透明牛奶封閉緩沖液一起孵育30分鐘。將4EBP1一抗（ 1:1000透明牛奶封閉液）加入印跡膜中，并在室溫下孵育12 小時。去除一抗，將GAR-HRP 二抗（1:175,000，TBST）加入印跡膜中，孵育2 小時。使用SuperSignal West Dura 化學發(fā)光底物進行檢測。使用iBright FL1500 成像系統(tǒng)捕捉圖像。繪制每條泳道中裂解物的局部背景校正灰度。注：GAM= 山羊抗鼠；HRP= 辣根過氧化物酶；TBST= 含Tween™（溶液）的緩沖液；GAR= 山羊抗兔

結(jié)果一致且可重現(xiàn)

預(yù)組裝的一次性耗材和超快速轉(zhuǎn)印方法減少影響轉(zhuǎn)印結(jié)果的變量，有助于確保結(jié)果的一致性和重現(xiàn)性。此外，具有內(nèi)置冷卻功能的全新堅固設(shè)計減少了熱量積聚，提高了每次運行條件的一致性。