單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是指在單個細胞水平上，對轉(zhuǎn)錄組等遺傳信息進行高通量測序分析的一項技術(shù)。  研究罕見或珍貴的樣本，比如神經(jīng)元細胞、干細胞、CTC等，需要非常高的靈敏度和再現(xiàn)性，因為單個細胞中RNA的含量十分有限（根據(jù)單個細胞的大小等情況不同，每個細胞可能只含有幾十皮克的RNA）。因此，生成沒有偏倚的mRNA-seq cDNA文庫是很具有挑戰(zhàn)性的一項工作。

創(chuàng)新研究不斷推動新技術(shù)的邊界，以獲得引人注目的結(jié)果，而這其中仍然需要試劑、技術(shù)的支撐。在單細胞RNA-seq領(lǐng)域，Takara Bio提供的SMART技術(shù)，可以幫助研究人員進一步突破RNA-seq靈敏度上限，提供高質(zhì)量的單細胞轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果。本次推薦的新品SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)，就是整合UMI的單細胞/微量樣本的mRNA全長分析建庫試劑盒。

產(chǎn)品亮點

• “高端”的技術(shù)萬里挑一

基于Takara Bio的核心SMART技術(shù)(Switching Mechanism at 5' End of RNA Template)優(yōu)化改良，提供全長轉(zhuǎn)錄本信息，可以高靈敏度地在單細胞水平上分析差異表達、融合基因、可變剪接等。

• 加持的“標簽”鼎力相助

通過逆轉(zhuǎn)錄步驟添加分子標簽（UMIs），可以靈敏地識別PCR重復(fù)片段，并校正PCR擴增錯誤，從而獲得更高準確性的基因或轉(zhuǎn)錄本檢測數(shù)。

• 連貫的文庫構(gòu)建流程

同時整合了Takara Bio專利性 的文庫構(gòu)建技術(shù)（U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727, 10,196,686, 10,208,337, 和11,072,823），利用特別的莖環(huán)形接頭構(gòu)建高品質(zhì)Illumina文庫！另外，搭配使用Unique Dual Index Kits（單獨銷售），可以提供完整的從樣品到cDNA合成，再到文庫構(gòu)建的實驗體驗。同時搭配特別開發(fā)的Cogent NGS生物信息學(xué)分析軟件，能直接對下機數(shù)據(jù)進行分析！

性能展示

• 再現(xiàn)性測試數(shù)據(jù)

以10 pg K562 RNA以及3種不同起始量 (100 pg, 1 ng和10 ng)的 UHR RNA樣本起始，使用SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)構(gòu)建測序文庫，均做3個重復(fù)。然后進行測序，并使用CogentAP進行分析。結(jié)果顯示，重復(fù)之間相關(guān)性系數(shù)非常高。即使起始量為10 pg時，也具有非常高的重現(xiàn)性！

• 靈敏度測試數(shù)據(jù)

對36例核酸含量較低的PBMC樣本，使用SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)制備文庫，并進行測序分析。結(jié)果顯示，通過基因表達譜分析確認了70%的PBMC是T細胞，這符合來自正常健康供體的PBMC預(yù)期比例。此外，還鑒定確認一個B細胞、一個NK細胞，一個單核細胞和兩個樹突狀細胞，另有6個細胞無法明確類型。由此也說明SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)在單細胞水平的RNA-Seq分析上具有高靈敏度。
 
• 添加UMI校正偏差

分別對10 pg RNA和單個細胞獲得的RNA樣本，摻入ERCC control RNA后進行文庫制備，然后進行測序分析。結(jié)果顯示，添加UMI后，決定系數(shù)R2值明顯提高，表明添加UMI降低PCR duplication，獲得更準確的RNA counts。

• 兼容自動化平臺

SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)兼容多種自動化液體工作站進行微縮化建庫。比如使用SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)在Mantis Liquid Handler (Formulatrix)上將反應(yīng)體系體積微縮至1/2（HV），1/4（QV）以及在mosquito HV liquid handler (SPT Labs)上將反應(yīng)體系體積微縮至1/8，均能獲得與使用原反應(yīng)體系高度一致的結(jié)果。保證性能的同時，降低了成本和操作時間！
 
PS：另外還有兩款新品，也值得關(guān)注哦！

• SMART-Seq mRNA LP：少量細胞/微量樣本的mRNA-Seq文庫構(gòu)建試劑盒。它使用oligo(dT)引物起始，優(yōu)化用于從10 pg-100 ng的高品質(zhì)total RNA(RIN≥8)或1-1000個完整細胞起始，生成高質(zhì)量的測序文庫。
• SMART-Seq mRNA：少量細胞/微量樣本的cDNA合成試劑盒。它可以用于Ultra low RNA（10 pg-100 ng）或少量細胞（1-1000個完整細胞）cDNA合成的試劑盒，提供全長轉(zhuǎn)錄本的信息。