慢病毒是一種可用于在包含原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等非分裂細(xì)胞在內(nèi)的哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行基因?qū)�入的多用途工具。Takara推出的LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列載體可以幫助你獲得高安全性、高效價的慢病毒。

產(chǎn)品介紹

LVpro Packaging Mix是經(jīng)過優(yōu)化的質(zhì)粒混合物，高效表達(dá)慢病毒制備所需要的成分，可包裝生產(chǎn)高滴度重組慢病毒。

pLVpro vector是tat非依賴性第三代慢病毒載體，其中5’LTR的U3區(qū)域被CMV啟動子取代，并且在不影響感染滴度的情況下刪除了包裝信號附近的HIV來源序列。

將pLVpro vector和LVpro Packaging Mix共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞，包裝質(zhì)粒瞬時表達(dá)Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，這有助于將重組病毒RNA（從pLVpro慢病毒載體轉(zhuǎn)錄而來）包入完整的病毒粒子中。使用這種經(jīng)過優(yōu)化的包裝質(zhì)粒混合物和高效轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR 6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR 2700），可以獲得高滴度的重組慢病毒，而且在多數(shù)情況下，該病毒可用于直接感染靶細(xì)胞，而不需要事先進(jìn)行濃縮處理。

產(chǎn)品特點

√ HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體
√ 臨床研究使用可能，將HIV-1來源序列排除到極限，提高安全性
√ 優(yōu)化了包裝系統(tǒng)，制備高滴度慢病毒粒子
√ 和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector組合使用可進(jìn)行P2實驗（注：取決于插入基因）

實驗例①

LVpro Packaging Mix和其他品牌同類試劑盒制備的慢病毒滴度比較

將表達(dá)ZsGreen1的慢病毒載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞制備重組慢病毒，使用HT-1080細(xì)胞評估其生物學(xué)效價。與全部使用A公司產(chǎn)品的場合【1】相比，部分使用Takara產(chǎn)品的場合【2、3】得到的慢病毒滴度要高出10倍。另外，在全部使用Takara產(chǎn)品的場合【4】得到慢病毒滴度是最高的。

Takara Bio Inc.比較結(jié)果

實驗例②

兩種慢病毒基因?qū)�入方法比較：RBV-Spin法 vs Polybrene法

使用LVpro Packaging Mix制備表達(dá)ZsGreen1的慢病毒并進(jìn)行30倍稀釋，然后分別通過RetroNectin（Code No. T100A）的RBV（RetroNectin Bound Virus）-Spin法或Polybrene法對人外周血單核細(xì)胞（PBMC）進(jìn)行基因?qū)�入，比較這兩種方法的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。

感染3天后回收細(xì)胞，測定ZsGreen1陽性細(xì)胞率。結(jié)果顯示，Polybrene法的陽性率為10%左右，而RBV-Spin法的陽性率在20%以上，與Polybrene法相比顯示出較高的陽性率。

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