今天的文章將圍繞m6A測(cè)序后必須要了解的一種定量技術(shù)——m6A-IP-qPCR（也叫MeRIP-qPCR）。

所謂m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR，即利用m6A抗體在富集到帶甲基化修飾的RNA后，下一步使用qPCR直接對(duì)富集到的RNA進(jìn)行定量的一種技術(shù)。

這種技術(shù)可以做到對(duì)發(fā)生甲基化的RNA進(jìn)行相對(duì)定量，是一種低成本的檢測(cè)方法，僅需m6A抗體，A/G免疫磁珠，磁力架和qPCR儀及配套試劑盒即可開(kāi)展這類(lèi)實(shí)驗(yàn)。

第一步：提取total RNA，作為可選步驟可以用OligodT磁珠富集帶polyA尾的mRNA。
第二步：將A/G免疫磁珠和m6A抗體按照試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行預(yù)混，配制免疫磁珠抗體預(yù)混液。
第三步：將預(yù)混好的免疫磁珠m6A抗體加入total RNA或mRNA中，若RNA上的腺嘌呤上帶有m6A甲基化修飾，則m6A抗體會(huì)與之相結(jié)合。
第四步：采用磁力架對(duì)m6A免疫磁珠進(jìn)行富集。
第五步：用蛋白酶對(duì)富集到的RNA-抗體復(fù)合物進(jìn)行消化，m6A抗體被消化完后只剩下RNA。
第六步：進(jìn)入常規(guī)的qPCR的步驟。

當(dāng)然這里需要注意的是，這類(lèi)實(shí)驗(yàn)僅僅是對(duì)發(fā)生RNA甲基化的基因進(jìn)行相對(duì)定量檢測(cè)，甲基化程度高應(yīng)該還要和基因本身的轉(zhuǎn)錄水平相結(jié)合。MeRIP-qPCR還需要結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)，如常規(guī)的qPCR、WB等才能從多個(gè)角度來(lái)驗(yàn)證，最終得到想要的結(jié)果。

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