在CRISPR/Cas9基因編輯中，人們可通過各種不同的方法來導入編輯工具。質粒轉染是一種普遍使用的方法，但未必適用于那些難于對付的細胞，比如人誘導多能干細胞（iPSC）。若您的實驗室中有電穿孔儀，那么不妨試試電穿孔的方法，將Cas9核酸酶導入細胞。

與借助質粒導入Cas9基因序列方法相比較，電穿孔導入方法避免了殘留Cas9基因的持續表達，有效抑制了脫靶效應。它無需經過蛋白質轉錄•翻譯•表達的過程，可以實現快速有效的突變導入。Takara旗下公司Clontech的Guide-it Recombinant Cas9（Electroporation-Ready）就是專為此用途而設計的。

Guide-it Recombinant Cas9（Electroporation-Ready）是來源于野生型化膿性鏈球菌Streptococcus pyogenes，適用于CRISPR/Cas9基因編輯實驗的重組Cas9蛋白質溶液。高濃度Cas9蛋白質溶液中的甘油濃度比其他公司低，特別適用于電穿孔導入方法。

不過，需要注意的是，Cas9導入細胞前首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白復合物，sgRNA制備推薦使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit或者Guide-it Complete sgRNA Screening System。效果如何？請看下圖。

圖1. AAVS1或者CXCR4基因同源重組修復（HDR）效率

Guide-it Recombinant Cas9（Electroporation-Ready）和修復模板復合物通過電穿孔的方式導入至CD34＋造血干細胞中檢測同源重組修復（HDR）效率。將包含Hind III酶切位點的修復模板插入至AAVS1 基因中，包含Hind III和BamH I酶切位點的修復模板插入至CXCR4基因中。之后通過對細胞內靶基因進行PCR擴增和限制酶剪切分析，確認突變導入效率。基因編輯效率標注在凝膠陽性孔處。在基因編輯前野生型CXCR4基因已包含1處BamH I位點，因此BamH I剪切CXCR4基因后額外多顯示一條條帶。

圖2. 不同公司Cas9產品在hiPS細胞中基因敲除效率比較

剪切后電泳條帶的強弱可以半定量估計發生基因編輯細胞的百分數。Guide-it Recombinant Cas9（Electroporation-Ready）與Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制備的sgRNA相結合，通過電穿孔的方法導入Cellartis hiPSC-18細胞，采用Guide-it Mutation Detection Kit確認突變導入效率，％即表示基因編輯效率。如圖所示，Guide-it Recombinant Cas9（Electroporation-Ready）在多數靶基因位點均顯示有效的基因編輯。

比較結果來自于Takara Bio USA, Inc.