Promega的科學家近日開發(fā)出一種新方法，可對細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進行輕松檢測。這種稱為HiBiT的多肽標簽可與任何蛋白質(zhì)相連接，從而實現(xiàn)高度定量且極其靈敏的生物發(fā)光檢測。這樣無需使用抗體，即可利用生物發(fā)光對蛋白進行定量。

HiBiT只有11個氨基酸，因此很容易與CRISPR/Cas9基因編輯技術相結合，精確插入基因組，從而使研究人員能夠在生理相關條件下研究蛋白質(zhì)。這種方法改變了傳統(tǒng)的蛋白檢測，不僅節(jié)省時間，也提高效率和精度。

檢測低豐度蛋白

許多低豐度蛋白在細胞中發(fā)揮重要作用，不過難以檢測和定量。HiBiT檢測是基于生物發(fā)光，因而比熒光檢測方法（如GFP）更加靈敏。這讓研究人員可以檢測極低水平的蛋白質(zhì)。不光靈敏，它也是高度定量的。連續(xù)稀釋的HiBiT標記蛋白產(chǎn)生了至少7個數(shù)量級的線性檢測范圍。

更加高效地標記

如何追蹤內(nèi)源蛋白質(zhì)？標記它！如今，最輕松的方法是利用CRISPR/Cas9基因組編輯來插入報告基團，如GFP或螢光素酶。不過，這些報告基團很大，通常需要質(zhì)粒供體，因此插入效率很低。而HiBiT非常小，只需要單鏈寡核苷酸（ssODN）供體，插入效率一下子就提高了很多。

無需克隆和等待

若要給目的蛋白加上GFP報告基因，那就需要分子克隆操作，這不僅費時，也很麻煩。相比之下，HiBiT只需要ssODN供體，所有組分都可以直接訂購。檢測過程也很簡單，只需在細胞中加入Nano-Glo HiBiT Lytic Detection Reagent，等待10分鐘，將微孔板放在檢測儀上即可。這個過程可比抗體檢測的封閉、孵育和洗滌快多了。

實時檢測活細胞

蛋白質(zhì)是高度動態(tài)的，例如，HIF1α的表達在缺氧條件下增加，而在氧氣供應后迅速降解。之前，人們每隔幾分鐘裂解一次細胞，然后開展Western blot。現(xiàn)在有了HiBiT，研究人員能夠?qū)崟r監(jiān)控活細胞。有人曾做過實驗，在恢復氧氣供應后每隔30秒監(jiān)控HiBiT編輯過的細胞，發(fā)現(xiàn)HIF1α-HiBiT的半衰期不到6分鐘。如果有生物發(fā)光顯微鏡，還能夠?qū)崟r觀察蛋白質(zhì)處于什么位置。

總的來說，HiBiT標記是一種檢測內(nèi)源性蛋白質(zhì)的靈敏、可靠且快速的方法。如果你的目標蛋白找不到合適的抗體，或者你已經(jīng)厭煩了抗體檢測，那不妨試試這種新方法吧。（生物通 余亮）