人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells，人iPS細(xì)胞) 是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備無限增殖、自我更新、分化為多種細(xì)胞類型的能力，而且人iPS細(xì)胞還可以再現(xiàn)細(xì)胞來源個體的疾病表型和基因型。人iPS細(xì)胞結(jié)合新的CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，就可以進(jìn)行疾病模型中遺傳變異的功能性研究以及更深遠(yuǎn)的再生醫(yī)學(xué)研究。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)只需一個Cas9核酸酶結(jié)合一個單鏈向?qū)�RNA（ single guide RNA，sgRNA)就可以決定其靶向特異性，進(jìn)行基因編輯 (Jinek et al. 2012)。這兩個組件可以通過多種方法成功導(dǎo)入至靶細(xì)胞，如載體表達(dá)系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，或直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)。與載體表達(dá)系統(tǒng)相比，直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應(yīng)的可能性更小 (Kim et al. 2014)。Takara旗下的Clontech品牌提供兩種Cas9/sgRNA RNPs導(dǎo)入方法，即電穿孔（Electroporation）導(dǎo)入系統(tǒng)或者納米囊泡（Gesicle）導(dǎo)入系統(tǒng)，幫助您實現(xiàn)高效的、低脫靶效應(yīng)的基因編輯。

一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入, 為了分離和篩選感興趣的基因型，單細(xì)胞需要被分離并擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系。傳統(tǒng)的hiPS 細(xì)胞以集落狀生長和傳代，不利于進(jìn)行單細(xì)胞分離和單細(xì)胞培養(yǎng)，為基因編輯后hiPS 細(xì)胞建立克隆增加了難度。Takara旗下Cellartis品牌的DEF-CS™ culture system（Asplund et al. 2016）是一個支持無飼養(yǎng)層、基于細(xì)胞單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn)，允許單細(xì)胞傳代和促進(jìn)接種的單細(xì)胞存活和后續(xù)擴(kuò)增，幫助您獲得基因編輯后感興趣的單細(xì)胞克隆。

從開始到結(jié)束，Takara全套的人iPS細(xì)胞基因編輯工具任您選擇。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴(kuò)增和擴(kuò)大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細(xì)胞至96孔板到擴(kuò)增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統(tǒng)，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進(jìn)行有效的基因編輯以及隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統(tǒng)，允許通過gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進(jìn)行有效的基因編輯隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細(xì)胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

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