-
生物通官微
陪你抓住生命科技
跳動的脈搏
生物通官微
陪你抓住生命科技
跳動的脈搏
細胞來源的納米囊泡（Gesicle），使Cas9和sgRNA導(dǎo)入so easy![新品推薦]
【字體： 大 中 小 】 時間：2016年12月07日 來源：Takara
編輯推薦：
對于分裂細胞、非分裂細胞、iPS細胞而言，其低的轉(zhuǎn)染效率會導(dǎo)致基因編輯效率降低。針對這種情況，Takara旗下Clontech的Guide-it產(chǎn)品線推出一款納米囊泡（Gesicle）系統(tǒng)，在CRISPR/Cas9 基因編輯難轉(zhuǎn)染細胞時，輕松實現(xiàn)Cas9和sgRNA的導(dǎo)入。
第三代基因組編輯技術(shù)CRISPR/Cas9，以RNA為基因組定位工具，靶點位置更多，設(shè)計操作簡單易行，使得基因編輯應(yīng)用變得廣泛起來。Takara旗下Clontech的Guide-it產(chǎn)品線為CRISPR/Cas9基因編輯實驗提供完整的解決方案，包括前期sgRNAs設(shè)計、sgRNAs獲取及體外效率評估、Cas9和sgRNA導(dǎo)入、以及后期基因編輯后單細胞基因型確認。
對于分裂細胞、非分裂細胞、iPS細胞而言，其低的轉(zhuǎn)染效率會導(dǎo)致基因編輯效率降低。針對這種情況，Takara旗下Clontech的Guide-it產(chǎn)品線在2016年推出一款納米囊泡（Gesicle）系統(tǒng)，解決了利用CRISPR/Cas9 基因編輯難轉(zhuǎn)染細胞時，Cas9和sgRNA難導(dǎo)入的問題。
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System是一種細胞來源的納米囊泡，將Cas9和sgRNA包被其中，用于傳遞Cas9/sgRNA；Gesicle表面附有具有細胞膜親和特性的NIGP蛋白質(zhì)，使其可以與廣泛的細胞類型相融合；Gesicle表面同樣也附著有CherryPicker紅色熒光蛋白質(zhì)，使其便于通過熒光顯微鏡進行監(jiān)測。
Cas9-sgRNA Gesicle可借助Gesicle Producer 293T細胞自行制備，根據(jù)所使用的不同sgRNA，可以制備產(chǎn)生靶特異Cas9-sgRNA Gesicle。整個制備過程簡單易操作，只需要將表達sgRNA的質(zhì)粒與試劑盒提供的Mix 1和Mix2混合后孵育一段時間后，將其添加至Gesicle Producer 293T細胞培養(yǎng)液中，在A/C Heterodimerizer異源二聚化配體的共同作用下，便可制備獲得Cas9-sgRNA Gesicle，收集細胞培養(yǎng)液便可獲取Cas9-sgRNA Gesicle。
將制備完成的Cas9-sgRNA Gesicle添加至靶細胞培養(yǎng)液中，Gesicle會與細胞膜發(fā)生融合并將Cas9/sgRNA釋放至細胞內(nèi)部，Cas9會在細胞內(nèi)被分解代謝。Gesicle與細胞膜融合后，CherryPicker紅色熒光蛋白質(zhì)會被轉(zhuǎn)移至靶細胞的細胞膜上，紅色熒光蛋白質(zhì)的存在，可以通過熒光顯微鏡監(jiān)測Cas9/sgRNA的傳遞；由于Gesicle不會與細胞基因組發(fā)生整合，避免了基因整合所可能帶來的潛在影響，降低了脫靶效應(yīng)；由于Gesicle添加時間及劑量的可控性，使得可以在需要的時間進行基因編輯實驗；Gesicle通過細胞融合的方式傳遞Cas9/sgRNA，因此Gesicle可適用于廣泛的細胞類型。
（文中涉及圖片均來源于Takara Bio USA, Inc.）
