過去6年，生物通一直在追蹤生命科學(xué)領(lǐng)域最前沿的創(chuàng)新產(chǎn)品，將其介紹給大家。2014年，生物通繼續(xù)搜羅新上市的產(chǎn)品，為大家奉上一場技術(shù)盛宴。經(jīng)過一個(gè)半月的網(wǎng)頁和微信投票以及專家評(píng)鑒，2014生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品終于出爐。

在2014年，CRISPR基因組編輯技術(shù)無疑是一顆閃亮的明星。文章的接連發(fā)表，顯示出CRISPR技術(shù)在科學(xué)研究和疾病治療中的巨大潛力。然而，這種技術(shù)也并非完美，多項(xiàng)研究表明，CRISPR/Cas9系統(tǒng)可能存在脫靶效應(yīng)。為了克服這一點(diǎn)，Sigma-Aldrich公司推出了改造的產(chǎn)品 – CRISPR配對(duì)切口酶。

Cas9-D10A切口酶配合一對(duì)gRNA使用，可以減少意外的脫靶基因修飾。它分別在相對(duì)的兩條DNA鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的雙鏈斷裂。這種設(shè)計(jì)能最大限度降低脫靶效應(yīng)，同時(shí)保持高效而又特異的基因修飾。為此，CRISPR配對(duì)切口酶被生物通讀者評(píng)為2014年度的創(chuàng)新產(chǎn)品。

此前，Broad研究院的張鋒博士曾在《Cell》雜志上發(fā)表文章，證實(shí)Cas9切口酶突變體的使用能降低CRISPR/Cas9系統(tǒng)的脫靶效應(yīng)1。在那項(xiàng)研究中，通過配對(duì)切口，基因組編輯的脫靶效應(yīng)被降低50-1500倍。作者認(rèn)為，這種策略可應(yīng)用于需要高特異性的基因組編輯研究。

如今，Sigma-Aldrich公司CRISPR配對(duì)切口酶的上市，讓研究人員也能享用到這一成果。大家可能比較關(guān)心，如何設(shè)計(jì)和訂購這一產(chǎn)品。Sigma-Aldrich目前提供預(yù)制的CRISPR/Cas9產(chǎn)品，覆蓋人、大鼠、小鼠的編碼基因。大家可聯(lián)系客服或在網(wǎng)上進(jìn)行選擇和訂購。網(wǎng)址如下：https://crispr.sigmainformatics.com/CrisprSearch.php。當(dāng)然，大家也可以定制自己的CRISPR/Cas9產(chǎn)品。

在基因組編輯領(lǐng)域，Sigma-Aldrich一直敢為人先。多年前，它就率先推出了基因組編輯工具鋅指核酸酶（ZFN）。CRISPR/Cas9是Sigma-Aldrich公司推出的新一代基因組編輯工具。隨著技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，Sigma不斷更新和完善CRISPR產(chǎn)品，以滿足廣大客戶的需求。

• Cas9/gRNA單質(zhì)粒系統(tǒng)

Cas9和gRNA構(gòu)建在單個(gè)載體上，提高轉(zhuǎn)染效率；此外，GFP與Cas9共表達(dá)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)陽性細(xì)胞的富集；優(yōu)化配置的啟動(dòng)子則可大大提高gRNA和Cas9在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)效率。

• Cas9-D10A雙切口酶系統(tǒng)

改造的Cas9-D10A配合使用一對(duì)gRNA，利用雙切口酶活性增強(qiáng)識(shí)別特異性，最大限度地降低脫靶效應(yīng)。

• 高度純化的RNA系統(tǒng)

純化的gRNA和Cas9 mRNA直接用于胚胎顯微注射，可避免啟動(dòng)子不兼容性和質(zhì)粒隨機(jī)整合的風(fēng)險(xiǎn)，尤其適用于胚胎注射以及對(duì)dsDNA敏感、存在啟動(dòng)子細(xì)胞不兼容的細(xì)胞。

除此之外，Sigma還可提供適合各類CRISPR產(chǎn)品的陽性和陰性對(duì)照，以及詳細(xì)的技術(shù)介紹和應(yīng)用說明，保證您的工作更簡化、更高效。

我想了解Sigma-Aldrich的CRISPR/Cas9產(chǎn)品

參考文獻(xiàn)

1. F. Ann Ran, Patrick D. Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S. Gootenberg, Silvana Konermann, et al. Double Nicking by RNA-Guided CRISPR Cas9 for Enhanced Genome Editing Specificity. Cell, Volume 155, Issue 2, 10 October 2013, Pages 479-480