Western blot雖然是蛋白質研究中最常用的技術之一，但想說愛它也不容易。這是一項非常不確定的技術。有時，忙上一天，最后什么結果也沒有。有時，結果挺好，但再也重復不了。據統計，Western blot的實驗差異性高達35-45%。這使得人們陷入了深深的憂慮：如何才能讓Western blot的結果更加一致呢？

如今，這個問題有了一個很好的答案。GE Healthcare的Amersham WB系統集成了標準化的Western blot實驗流程，包括電泳、轉印、印跡和成像分析功能，有望大大減少實驗中的差異，帶來一致的、定量的蛋白質分析結果。這臺完全一體化的系統由GE Healthcare位于瑞典烏普薩拉的蛋白科學卓越中心實驗室研發，在2014年底上市。

 
圖1. Amersham WB主機

Amersham WB由主機、軟件和專屬耗材組成。Amersham WB主機（圖1）包括兩部分：電泳掃描單元（左）和印跡單元（右）。電泳掃描單元主要負責SDS-PAGE以及凝膠或膜成像；而印跡單元則用于轉印、雜交孵育和干燥。

有了Amersham WB系統，Western blot實驗可在4小時之內完成，而無需一整天的漫長等待。無論你是開展傳統的單色分析，還是定量的雙通道分析，它都能搞定。下面我們就來看看Amersham WB系統是如何帶來一致結果的。

第1步：電泳（42分鐘）

在這一步中，電泳裝置能夠在恒定溫度下提供高度均一的電流，再加上標準化的試劑和耗材，Amersham WB系統大大提高聚丙烯酰胺凝膠電泳的一致性。Amersham WB預制膠優化了濃縮膠和分離膠的區域，可帶來出色的分辨率；而配套的電泳緩沖液條取代了液體緩沖液，使用方便且重復性好。這些特征讓電泳步驟的變化降至最低程度，產生了容易定量和分析的條帶。

GE Healthcare還提供了Amersham WB Cy5總蛋白標記試劑，可以很容易地預標記蛋白質，這樣在電泳后無需染色即可直接檢測總蛋白。利用Cy5總蛋白信號歸一化目標信號，可以校正上樣誤差，而無需預先定量。

第2步：轉印（30分鐘）

從制作三明治，到蛋白質從凝膠轉移到膜上，所有關鍵的參數和組件都經過標準化，有利于帶來最佳的結果和最低的背景。Amersham WB PVDF卡設計巧妙，可避免用戶誤操作，而濾紙也已經切好，配合轉印架的設計，減少出錯的可能。在關閉轉印架時，內置的滾筒可以去除氣泡，增加重現性。內置的冷卻也能保持恒定的溫度，避免過熱。

有了這一系列的措施，轉印也能夠高度重現，而不再需要擔心實驗間的差異。同時，你也不需要一次又一次地重復實驗，從而節省時間，節省經費。

第3步：雜交（155分鐘）

大家都知道，一抗很珍貴，因此都在想方設法少用一點。Amersham WB系統也能滿足你的這個愿望。系統的高靈敏度以及步驟和組件的優化意味著你最多能節省50%的一抗。此外，一抗也能回收，用在后續的實驗中。

封閉、洗滌、一抗和二抗孵育，這些繁瑣的操作都由系統自動完成，而你所要做的只是加入一抗、二抗、封閉液和洗滌液，然后按下Start按鈕。之后，你就可以抽身去做其他的事，或者去吃飯。不放心的話，還能通過手機上的Amersham WB Watch app來遠程監控實驗過程。

第4步：檢測和成像（15分鐘）

低熒光背景的PVDF卡，經過優化的熒光標記試劑，以及高性能的激光掃描儀，這些帶來了高質量的定量數據。因此，你可以靈敏檢測蛋白豐度的微小變化，分離和比較磷酸化與非磷酸化蛋白，并在同一塊印跡上準確測定高豐度和低豐度蛋白。

德國癌癥研究中心的Martin Teichert談道：“因為它的動態范圍很寬，所以不再有傳統ECL的所有限制。突然，我們就能比較之前無法比較的樣品。”

第5步：分析（1-2分鐘）

對于數據分析而言，軟件的方便好用至關重要。掃描一結束，Amersham WB軟件自動開展數據分析，通過柱狀圖、泳道圖和表格顯示關鍵信息。它能顯示所選擇泳道和條帶檢測結果，定量目標蛋白相對雜質的百分比，并利用總蛋白或內參蛋白來歸一化目標蛋白的信號。在你滿意了分析結果之后，也能輕松導出這些可立即發表的圖像和數據。

此外，Amersham WB軟件也提供多種應用的標準化實驗方案，比如蛋白組成和豐度的快速篩選，比較樣品間蛋白質水平的定量分析。屏幕左側顯示正在運行的項目和參數，如有必要，可在屏幕右側修改實驗方案的默認參數。在整個Western blot過程中，大多數操作由儀器自動完成，你只需要做少量的準備工作，這個可以讓手機上的Amersham WB Watch app提醒你。

現在，你不再擔心Western blot的結果像抽獎了吧。通過這臺智能的儀器，專屬的耗材和精心優化的實驗方案，你可以獲得更加定量、更容易重現的Western blot數據。這樣，你就能少一些重復，少一些優化，也少一些troubleshooting。關鍵是，對結果更有信心。（生物通 余亮）

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