下列操作介紹了將蛋白質(zhì)過(guò)濾到Immobilon® PVDF轉(zhuǎn)印膜的標(biāo)準(zhǔn)步驟。關(guān)于更多信息，請(qǐng)查看您的轉(zhuǎn)印系統(tǒng)附帶的操作指南。

提示：去污劑可能抑制蛋白質(zhì)與Immobilon® PVDF轉(zhuǎn)印膜的結(jié)合。

建議 – 粘稠的樣品必須用緩沖液稀釋，以降低粘稠度。

必需的設(shè)備和溶液
• 兩張Immobilon® PVDF轉(zhuǎn)印膜，切成轉(zhuǎn)印裝置的大小。
• 濾紙，切成轉(zhuǎn)印裝置的大小。
• 甲醇，100%
• Milli-Q® 水
• 緩沖液，用于上樣和清洗。
• 轉(zhuǎn)印裝置，斑點(diǎn)印跡或狹縫印跡形式。

準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備膜。
a. 將膜在甲醇中浸泡15秒。膜應(yīng)均勻地從不透明變成半透明。
b. 小心將膜放入Milli-Q® 水中，浸泡2分鐘。
c. 小心將膜放入緩沖液中，至少平衡5分鐘。
2. 將樣品溶解在緩沖液中。如果樣品溶液混濁，離心以去除顆粒。如果樣品粘稠，用更多緩沖液稀釋。

轉(zhuǎn)印裝置的組裝
關(guān)于詳細(xì)的組裝說(shuō)明，請(qǐng)參看制造商的操作指南。
1. 將一張濕潤(rùn)的濾紙放在裝置上。一些裝置可能需要多張。
2. 將兩張膜放在濾紙上面*。
3. 蓋上裝置。
4. 連接真空管。

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印
1. 短暫施加真空，以去除多余的緩沖液。
2. 關(guān)閉真空，小心將樣品加入孔中。
3. 在轉(zhuǎn)印裝置上施加真空。
4. 當(dāng)所有樣品濾過(guò)膜時(shí)，關(guān)閉真空。
5. 在每孔中加入緩沖液，以清洗周圍。施加真空，讓清洗緩沖液濾過(guò)。
6. 當(dāng)所有清洗緩沖液濾過(guò)膜時(shí)，關(guān)閉真空。
7. 若要取出印跡，打開印跡裝置。
8. 用鑷子小心取出轉(zhuǎn)印膜。

立即索取印刷版《蛋白質(zhì)印跡手冊(cè)》

上一篇          下一篇