RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay 是一種新型的非裂解性、均質生物發光法細胞活力檢測系統，可檢測細胞還原電位繼而反應出細胞的代謝情況，而實時檢測培養基中的活細胞數量。檢測系統采用性能出眾的 NanoLuc® luciferase 和可滲透細胞的 NanoLuc® 底物前體。活細胞可將特異性底物前體還原而產生 NanoLuc® luciferase 底物。這種底物可從細胞中擴散到外周的細胞培養基中，從而與 NanoLuc® Luciferase 快速反應而產生發光信號。信號強度與活細胞數量相關，因此可以用于細胞毒性研究。試劑最長可在 72 小時內保持性能穩定，對活細胞沒有毒性。無需洗滌細胞，去除培養基，或加入其它試劑即可完成活細胞數量檢測。試劑本身的非裂解的特性使其可在同一細胞培養孔中持續監測細胞，從而減少細胞用量和細胞培養的成本，細胞也可用于下游應用，包括多重檢測和核酸分析。

 
圖1.檢測原理圖示。

優勢

•  實時細胞活力檢測 : 實時監測細胞活力來確定細胞毒性的發作，參照一個簡單的，基于多孔板操作的實驗說明書可隨著時間的推移分析藥物的   效力和有效性，進行細胞生長的變化。
•  卓越的靈敏度 :  生物發光檢測系統，與基于還原電位檢測比色和熒光細胞活力檢測法相比，在更短的時間里檢測出數據的信噪比更高，靈敏度更佳。
•  實驗操作更靈活 : 可在鋪細胞時同時加入試劑進行檢測，或者與化合物一起加入，或者在任何需要檢測細胞活力的時間點加入進行檢測。另外，也可進行終點法細胞活力檢測。
•  非裂解性檢測模式 : 無需裂解即可檢測。可與其他發光或熒光檢測系統進行細胞的疊加檢測而無需特殊濾片，細胞也可用于多種下游應用。只需少量細胞樣本，即可獲得更多的數據。
•  公認的細胞活力檢測標志物 :  檢測原理是基于細胞還原電位的檢測，這是公認的可信的細胞活力的代謝標志物。
•  可用于自動化高通量篩選：檢測系統兼容自動化高通量操作。可在 96-, 384- 和 1,536 孔板這種低體積模式下檢測。

應用  

•  確定細胞活力。
•  確定細胞毒性的發生。
•  分析藥物效力和有效性。
•  分析細胞生長的差異。
•  確定上游分子應用的可行性。

 
圖2.使用RealTime-Glo™ MT細胞活力檢測試劑盒實時監測細胞活力，測定EC50。在384孔板中每孔加入40ul含有2X RealTime-Glo™ Reagent的培養基的A549細胞，細胞密度500個細胞/孔，再加入等體積2X bortezomib。72h監測發光信號。圖A:每小時檢測一次細胞活力(Tecan Infinite® P200 multimode reader with gas control module 937C/5% CO2)。EC50 數值以GraphPad Prism®軟件計算。圖B. 如圖所示，每個濃度與陰性對照組相比，細胞活力數據有3倍的變化。

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