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ECL Prime蛋白印跡試劑之使用心得[心得點評]
【字體: 大 中 小 】 時間:2013年11月11日 來源:生物通
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Amersham ECL Prime是ECL家族的新成員。它在靈敏度方面至少是ECL plus的兩倍,其最低檢測限(LOD)達到pg級。此試劑的特點在于大幅增加了信號的穩定性,這使得反復曝光變成可能,并能夠在一個實驗中輕松地進行多個印跡處理。
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說到ECL,做Western blot的人幾乎沒有不知道吧。自1990年上市以來,增強化學發光(ECL)蛋白印跡產品庫不斷豐富,以適應常規蛋白檢測到更為復雜的應用。有了ECL,蛋白分析比以往更加快速,也更加靈敏。
Amersham ECL Prime是這個家族的新成員。它在靈敏度方面至少是ECL plus的兩倍,其最低檢測限(LOD)達到pg級。此試劑的特點在于大幅增加了信號的穩定性,這使得反復曝光變成可能,并能夠在一個實驗中輕松地進行多個印跡處理。
此外,ECL prime所發射的信號強度提高了3到5倍,這也就意味著ECL prime可采用比ECL plus低3倍的一抗和二抗進行檢測,這不僅降低了背景,也節省了抗體的費用。
斯坦福大學的Hugo Hilton博士在Western blot實驗中就使用ECL。前面的步驟就不贅述了。對于化學發光檢測,他將1 mL ECL Prime檢測試劑溶液A與1 mL溶液B混合,加到NC膜上,在室溫下孵育5分鐘。然后用保鮮膜把膜包起來,放在X光膠片暗盒內。在暗室中放入X光膠片,曝光1、3、5分鐘,顯影。
Hilton認為,ECL Prime的靈敏度非常高。廠家的使用說明中提到該試劑能檢測低至1 pg的目的蛋白。在使用過程中,他們也的確能檢測到其他化學發光試劑所檢測不到的目的蛋白。X光膠片曝光3分鐘能帶來良好的信號,適合條帶的定量分析。
正是由于ECL Prime的靈敏度高,Hilton在實驗中對一抗和二抗進行了更高倍數的稀釋,至少是其他試劑的5倍,這也節省了不少一抗的費用。Hilton還提到,在與ECL試劑共同孵育時,一定要確保膜被試劑完全覆蓋。
其他用戶也認為ECL Prime是個靈敏、易用的檢測試劑。泰國瑪希隆大學的Narisorn Kitiyanant提到:“這是個非常靈敏的ECL。有時在倒入膜中之前,我們會用蒸餾水將其稀釋。它需要孵育5分鐘,就這么簡單。”波多黎各大學癌癥中心的Magaly Martinez-Ferrer認為:“使用起來非常簡單。有時只孵育1分鐘。背景很低。”
如此看來,ECL Prime的確是個人見人愛的好東西哦。GE Healthcare目前提供兩種規格,分別為50 ml和150 ml的包裝,適合1000 cm2和3000 cm2的膜。對于用量大的實驗室來說,大包裝無疑更劃算。(生物通 余亮)