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Renilla-Glo(TM)螢光素酶檢測系統(tǒng)[新品推薦]
【字體: 大 中 小 】 時間:2011年12月19日 來源:生物通
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參加2011生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品評選,了解生命科學(xué)發(fā)展的新動向!Promega公司開發(fā)出了全新的Renilla-Glo™螢光素酶檢測系統(tǒng)。它將便捷的“加樣、混合、檢測”的操作模式帶入使用海腎(Renilla reniformis)螢光素酶的實驗中。
在開展遺傳報告基因檢測時,生物發(fā)光是一種卓越的檢測方法。目前常用的是螢火蟲螢光素酶,但研究人員發(fā)現(xiàn),他們也需要一些較小且不需要ATP的報告基因,于是其他螢光素酶的使用也逐漸增多,諸如橈足類螢光素酶。這其中的最佳代表是海腎螢光素酶。
海腎螢光素酶來源于海腎(Renilla reniformis)。這種酶只有36 kDa,幾乎是螢火蟲螢光素酶的一半(61 kDa),且不需要ATP。Promega公司以此為基礎(chǔ),開發(fā)出了全新的Renilla-Glo™螢光素酶檢測系統(tǒng)。它將便捷的“加樣、混合、檢測”的操作模式帶入使用海腎(Renilla reniformis)螢光素酶的實驗中。
與傳統(tǒng)的螢火蟲螢光素酶相比,該檢測方法更適合較小分子報告基因的應(yīng)用實驗,是此類篩選的理想工具。延長的信號半衰期以及低背景的化合物支持其用于在很多篩選項目中常見的高密度平板模式。
Renilla -Glo™ 螢光素酶檢測系統(tǒng)僅需一個加樣步驟,即可在螢光素酶作用下產(chǎn)生輝光型信號。制成溶液后,該試劑可裂解細胞,從而減少腔腸素底物的自發(fā)螢光,以產(chǎn)生穩(wěn)定信號( 如22℃半衰期大于60 分鐘)。
這種“加樣、混合、檢測”的操作模式使得海腎螢光素酶報告基因系統(tǒng)的檢測變得非常簡單。無需分別進行裂解及試劑加樣,能改善檢測精度。光信號明亮,持續(xù)時間更長,為批量和連續(xù)處理做了優(yōu)化,而低背景模式更是增加了靈敏度。
此系統(tǒng)可應(yīng)用在多方面研究中,如轉(zhuǎn)錄調(diào)控、病毒-細胞相互作用、化合物篩選、轉(zhuǎn)錄后修飾、GPCR信號、細胞信號及啟動子分析中。
Promega提供了多種pGL4海腎螢光素酶載體。這些載體多數(shù)不含有真核啟動子,但在海腎熒光素酶基因的上游含有多克隆位點。部分載體含有SV40、CMV或HSV啟動子,可組成型表達海腎螢光素酶。
除了Renilla-Glo™螢光素酶檢測系統(tǒng),Promega還提供了雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)。它可在一個系統(tǒng)中用于測量兩個單獨的螢光素酶報告基因,螢火蟲螢光素酶及海洋海腎螢光素酶。一般地說,實驗報告基因用于檢測實驗條件下基因的表達,而另一個報告基因作為內(nèi)對照,以提供實驗報告基因檢測的歸一化。將實驗報告基因的活力與內(nèi)對照報告基因的活力作歸一化可消除實驗中不同檢測間的固有變化。在雙螢光素酶報告基因檢測中,螢火蟲螢光素酶作為實驗報告基因,而海腎螢光素酶作為對照報告基因。
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