對于需要活性蛋白的研究人員而言，昆蟲細胞不失為一個比較好的選擇。多年來，人們主要采用桿狀病毒表達系統(tǒng)在昆蟲細胞中生產(chǎn)重組蛋白。然而，制備重組桿狀病毒也是一個相當(dāng)麻煩且耗時的過程。就算實驗很順利，也要前前后后忙碌一個月，才能看到結(jié)果。實驗不順利的時候就更別提了，還得郁悶幾個月。

為了加速昆蟲細胞的表達過程，默克旗下的表達專家Novagen最近推出了BacMagic™系統(tǒng)，一種改進型的桿狀病毒方法。通過這種簡化的方法，無需噬斑篩選，7-10天獲得重組病毒顆粒，一路歡歌到純化……

BacMagic DNA是一種改造的苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒（AcNPV）基因組，其中關(guān)鍵的病毒基因ORF 1629的一部分已刪除，且用細菌人工染色體（BAC）代替了多角體編碼區(qū)。ORF 1629的刪除是為了防止非重組病毒在昆蟲細胞中復(fù)制，而BAC允許親本病毒DNA在細菌中以環(huán)狀DNA增殖。

目的基因和啟動子由轉(zhuǎn)移載體攜帶。利用Insect GeneJuice轉(zhuǎn)染試劑將轉(zhuǎn)移載體、BacMagic DNA共轉(zhuǎn)染進入昆蟲細胞。在同源重組之后，ORF1629的功能重建，且目的基因取代了BAC序列（下圖）。只有重組桿狀病毒才能在昆蟲細胞中復(fù)制，親本病毒無法復(fù)制，因此也就不需要噬斑純化，節(jié)省了至少10天。

BacMagic DNA的選擇有三種。BacMagic-1 DNA刪除了非必需的病毒幾丁質(zhì)酶基因（chiA），能改善分泌效率，從而大大提高分泌或膜定位重組蛋白的產(chǎn)量。BacMagic-2 DNA除了刪除chiA基因，還刪除了一種v-cath蛋白酶基因，使大部分目的蛋白的質(zhì)量和產(chǎn)量都顯著提高。BacMagic-3 DNA在此基礎(chǔ)上，還刪除了三個病毒基因（p10、p24和p26）。這些基因是非必需的，它們的刪除能改善蛋白表達。

轉(zhuǎn)移載體的選擇則更多，如雙系統(tǒng)穿梭載體pBAC™ 同時用于原核和昆蟲表達、三系統(tǒng)穿梭載體pTriEx™ 同時用于原核，昆蟲和哺乳動物細胞表達。另外，默克還新推出了pIEx/Bac雙功能載體，能同時用于瞬時轉(zhuǎn)染早期表達和重組病毒晚期表達，便于篩選合適的表達系統(tǒng)。

BacMagic™ DNA Kit中包含了BacMagic™ DNA，昆蟲細胞專用的Insect GeneJuice轉(zhuǎn)染試劑以及轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒。如果你們實驗室剛剛開始做昆蟲表達，那么可以選擇BacMagic™ Transfection Kit，它除了上述組分外，還包含了Sf9昆蟲細胞及培養(yǎng)基。

關(guān)于更多的昆蟲表達產(chǎn)品及載體選擇指南，請下載《昆蟲表達系統(tǒng)手冊》（PDF）（1.5 MB）

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