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    多功能 通用型 EmeraldAmp™ PCR Master Mix

    【字體: 時間:2009年10月21日 來源:生物通

    編輯推薦:

      EmeraldAmp™實現通用性強、簡單方便的PCR擴增反應,PCR反應液呈艷綠色,可以直接進行電泳,并且對GC rich模板也能進行良好擴增。

      

    創新點:EmeraldAmp™實現通用性強、簡單方便的PCR擴增反應,PCR反應液呈艷綠色,可以直接進行電泳,并且對GC rich模板也能進行良好擴增。


    特點:
    對GC rich模板也能進行良好擴增。
    操作簡便的預混型制品。
    可以進行Hot Start PCR反應。
    PCR反應液呈艷綠色,電泳時指示效果明顯。
    PCR擴增產物可以直接進行電泳。

    EmeraldAmp™ PCR Master Mix是PCR反應用各種試劑(酶、Buffer、dNTP Mixture等)的2倍濃度的預混型制品。DNA Polymerase使用了性能良好的Hot Start酶。使用本制品時,只需要在制品溶液中加入模板和引物便可進行PCR反應,簡化了操作步驟,減少了PCR操作過程中的污染。并且,本制品中已含有電泳時所必需的色素試劑(藍色和黃色色素),PCR反應后可以直接進行電泳。反應液為鮮艷的綠色(Emerald Green),電泳時指示效果明顯,容易觀察樣品的電泳位置。
    使用EmeraldAmp™ PCR Master Mix擴增得到的PCR產物3′端附有一個“A”堿基,可直接克隆于T-Vector中。EmeraldAmp™ PCR Master Mix對GC Rich模板也能得到良好擴增,以人基因組DNA為模板可以擴增10 kbp的DNA片段。

    PCR反應性能
    以人基因組DNA為模板,可以很好擴增8.5 kbp的DNA片段。

    電泳時色素Marker位置
    反應液5 ml,1% Agarose電泳時,藍色色素在3~5 kbp附近,黃色色素在50 bp以下位置。

    通常PCR反應使用量
    1. 按下列組份配制PCR反應液。

    EmeraldAmp™ PCR Master Mix 25 ml
    模板DNA*   X ml
    引物 1(20 mM) 0.5 ml
    引物 2(20 mM) 0.5  ml
    滅菌蒸餾水              Up to 50 ml

    *【50 ml PCR反應體系中模板DNA推薦使用量】
    人基因組DNA  50 ng~100 ng
    質粒DNA 1 pg~1 ng

    2. PCR反應條件。
    3 Step PCR
    98℃     10 sec
    55℃ or 60℃*  30 sec      
    72℃ 1 min/kbp
    30個循環

    * 擴增GC Rich模板時,退火溫度可以使用60℃。
    2 Step PCR
    98℃ 10  sec
    68℃ 1 min/kbp*    

    30個循環

    * 延伸時間設定在15 min以上時,擴增產物有時會產生Smear現象。

    應用例
    將插入5 kbp以上DNA片段的pUC118文庫進行轉化,對大腸桿菌菌落進行陽性克隆的篩選。

    電泳結果如下:

    1~8:菌落PCR反應液           
    M:λ-Hind III digest DNA Marker   

    1% Agarose;5 ml電泳

    通過電泳確認插入片段大小,選取PCR產物與目的片段大小一致的陽性菌落。

     

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